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髓过氧化物酶中性粒细胞所特有，即使在有强吞噬作用的世噬细胞中也极少或完全没有这种酶作为中性粒细胞得到标志。其功能为将氯氧化物和氧化氢转变为次氯盐酸。在炎症状态下，它被释入细胞外液，进入循环。此酶参与含LDL的脂类氧化。
中性白细胞中存在有髓过氧气化物酶，每个细胞所含的酶的量是一定的，约占细胞干重的5%，该酶具有使过氧化氢还原的能力，利用这一特点可以分析酶的活力，并定量测定中性白细胞的数目。
髓过氧化物酶检测原理如下：
MPO+ H2O2→复合物；复合物+AH2(供氢体)→H2O+MPO+A产物
通过供氢体邻连茴香胺供氢后生成黄色化合物，在460nm处通过比色测定产物的生成量从而推算出MPO的活力及H2O2减少的量和白细胞的数目。

组份名称	100T
试剂A缓冲贮备液	35mL
试剂B粉剂	2支
试剂C1粉剂	3支
试剂C2溶剂	6mL×3支
试剂D	24mL
试剂E粉剂	2支
试剂F	0.5mL
试剂G	6mL

试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
● 460nm的酶标仪● 37℃，60℃恒温水浴锅● 离心机● 移液器

保存条件：试剂D室温保存，其他2～8℃避光保存。有效期6个月。


● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 试剂D天冷时会凝固，使用前可放入37℃以上的水浴中摇晃使其溶解至透明后方可使用。


试剂配制：
1.试剂A缓冲工作液的配制：
按试剂A贮备液：纯水=1：9配制，用多少配多少，配好后充分混合后待用，配制好的工作液，2～8℃可保存1个月。
2.试剂B工作液配制：
使用前每支试剂B粉剂加配置好的试剂A缓冲工作液60mL溶解，可以37℃加热溶解；2～8℃可保存2周。
注：
● 若您所需要测定的是组织样本，并且除髓过氧化物酶之外，还需要测其他项目时，此时每支试剂B粉剂需配成浓缩一倍的溶液，即每支试剂B粉剂加到试剂A缓冲工作液30mL中。
3.试剂C工作液配制：
使用前将1支试剂C1粉剂倒入1支试剂C2溶剂中溶解；最好提前一天配制，充分溶解后2～8℃可保存2周。
4.显色剂配制：
使用前将试剂E粉剂1支加入到100mL试剂A缓冲工作液中，充分摇匀；待粉剂完全溶解后再加入试剂F 0.1mL，充分混匀，即得显色剂；2～8℃避光保存；
组织样本的操作步骤：
(一)、样本前处理
1.准确称取组织重量，以配好的试剂B工作液为匀浆介质，按重量：体积=1:19加匀浆介质制成5%的组织匀浆，不需要进行离心；
注：
● 若您除测髓过氧化物酶之外，还需要测其他项目时，则组织匀浆制备需按下面方法：
● 试剂B粉剂需配成浓缩一倍的溶液，即每支试剂B粉剂加到试剂A缓冲工作液30mL中；
● 先用生理盐水为匀浆介质制备成浓缩一倍的匀浆，即10%匀浆（脑组织制备成20%匀浆），不要离心，取出部分浓缩一倍匀浆按1:1的比例加入浓缩一倍的试剂B溶液，混匀后再进行测定。
2.取5%组织匀浆0.9mL加试剂C工作液0.1mL；充分混匀后37℃水浴15min，取出后待测；
注：
● 如果组织匀浆量不够，可以按9:1的比例减少组织匀浆及试剂C工作液的用量。
（二）、操作表
按下表在5mL离心管中加入试剂：

试剂（mL）	对照管	测定管
纯水	3
样本	0.2	0.2
试剂D	0.2	0.2
显色剂		3
充分混匀，37℃水浴30min。或者37℃培养箱孵育30分钟。
试剂G	0.05	0.05

充分混匀，60℃水浴10min。
取出后将试剂吸入96孔板，酶标仪检测。
用纯水调零，在460nm处测定各孔OD值。
注：
● 室温较低时，反应液会出现凝固状态，吸光度上升，待测试剂均应置于37℃预热1～2分钟，待凝固消失后检测；
● 室温较低时，试剂D出现凝固状态，使用前置于37℃预热，充分融解至澄清透明并混匀后再使用；
● 混匀时最好用漩涡混匀器，使液体上下充分混匀（一定要使下面的液体也能旋转到上面）。离心管比较难混匀，一定要充分涡旋振荡。
● 由于酶标仪种类很多，有些酶标仪不需要调零，自动调零，以实际使用的仪器为准。
（三）、计算公式：
1.MPO酶活力单位定义：
每克组织湿重在37℃的反应体系中每1μmol H2O2被分解，为1个酶活力单位；
2.计算公式：
MPO活力（U/克组织湿重）=
注：
● 11.3为斜率的倒数
● 取样量为取样中所含组织的湿重量（克）
3.计算举例：
取5%的小鼠心肌匀浆0.2mL按上述步骤进行检测，测得对照管OD值为0.030，测定管OD值为0.164，则计算结果如下：
MPO活力（U/克组织湿重）===1.186（U/克组织湿重）
注：
● 其中0.05为5%的组织匀浆。
● 0.2为取样量0.2mL。
血清（浆）样本检测：
(一)、样本前处理
1.取血清（浆）与试剂B工作液按1:1稀释，充分混匀；
2.取上面的混合液0.9mL加试剂C工作液0.1mL，充分混匀后37℃水浴15min，取出后待测；
注：
● 如果混合液量不够，可以按9:1的比例减少混合液及试剂C工作液的用量。
（二）、操作表：
按下表在5mL离心管中加入试剂：

试剂（mL）	对照管	测定管
纯水	3
样本	0.2	0.2
试剂D	0.2	0.2
显色剂		3
充分混匀，37℃水浴30min。或者37℃培养箱孵育30分钟。
试剂G	0.05	0.05

充分混匀，60℃水浴10min。
取出后将试剂吸入96孔板，酶标仪检测。
用纯水调零，在460nm处测定各孔OD值。
注：
● 室温较低时，反应液会出现凝固状态，吸光度上升，待测试剂均应置于37℃预热1～2分钟，待凝固消失后检测；
● 室温较低时，试剂D出现凝固状态，使用前置于37℃预热，充分融解至澄清透明并混匀后再使用；
● 混匀时最好用漩涡混匀器，使液体上下充分混匀（一定要使下面的液体也能旋转到上面）。离心管比较难混匀，一定要充分涡旋振荡。
● 由于酶标仪种类很多，有些酶标仪不需要调零，自动调零，以实际使用的仪器为准。
（三）、计算公式：
1.酶活力单位定义：每升血清（浆）在37℃的反应体系中H2O2被分解1μmol为1个酶活力单位；
2.计算公式：
MPO活力=
注：
● 11.3为斜率的倒数
● 取样量为取样中所含血清的量（升）
4.计算举例：
取0.45mL的血清加0.45mL的试剂B工作液充分混匀，再加0.1mL的试剂C工作液，再充分混匀，37℃水浴15分钟，取0.2mL做检测，测得测定管OD值0.053，对照管OD值0.013，则计算结果如下：
MPO活力==×1000=39.33（U/L）
注：
● 0.45为血清的量；
● 0.2为取样量0.2mL。
相关搜索：髓过氧化物酶(MPO)检测试剂盒(微板法)